HYPERCARB液相色谱柱内保存溶剂和仪器系统内存留溶剂，如果和流动相不匹配，使用前需进行转换。特别是流动村j含缓冲盐时，如保存溶剂足纯有机相或有机相比例高，直接将新柱接人使用，会导致缓冲盐在柱内结晶析出，造成柱头堵塞。建议仪器和色谱柱经常使用，用10%的有机溶剂保持即可。
日常分析工作中，我们使用的流动栩和待测样品应用0.45pm滤膜过滤后再连接或注入到色谱仪上。对于有机相比例高的流动栩可以一起过滤出来备用，但是有机相比例小的流动相一定要现用现滤，分析结束时一定要先用10%的有机溶剂冲洗管路及色谱柱，为有机相少的流动相容易滋生细菌，造成色谱柱堵寒，影响色谱柱性能。
短期保存(隔夜或隔周末)用所用的流动相(不含缓冲盐)保存为佳，以尽量减少下次使用的平衡时间。一般只建议在长期保存反相柱的时候用纯醇或乙腈，使用80%左右有机相保存也属好的选择，且足以避免长菌。强烈建议在柱身上贴标签标明保存溶剂。离子交换柱和水性凝胶柱等适合保存在水溶液中的色谱柱，可加0.05%溶液防止K菌。正相柱无论是短期还足长期，都推荐保存住所用流动相巾。
HYPERCARB液相色谱柱选择的方法和条件
①填料基质
a.硅胶基质：纯度高本钱低，强度大，化学修饰轻易，但pH值范围有限。大多硅胶基质填料在pH2-8之间稳定，但经过特殊修饰的硅胶键合相可以稳定在pH1.5-10。
b.聚合物基质：应用pH值范围宽，温度稳定(高温可以达到80度以上)，机械强度小。
②颗粒外形
大多现代HPLC填料都是球形颗粒，但有时是不规则的颗粒。球形颗粒提供较低的柱压、较高的柱效和稳定性以及较长的柱寿命在使用高粘度的活动相时;不规则颗粒有较大比表面积和相对低廉的价格。
③颗粒粒径
粒径越小柱效越高、分离度越高，但同时会导致较高柱压降。选择1.5-3μm的填料以解决一些复杂样品,UPLC可以使用1.5μm的填料;另外10μm或更大粒径的填料用作半制备或制备柱。
④含碳量
含碳量指的是硅胶表面键合相的比例，与比表面积和键合覆盖度等有关。高含碳量进步柱容量、分辨率及分析时间，用于要求高分离度的复杂样品;低含碳量分析时间短、展现不同的选择性，用于快速分析简单样品及需要高含水活动相条件的样品。一般C18的含碳量在7-19%不等。
⑤孔径和比表面积
HPLC吸附介质是多孔的颗粒，尽大多数的反应表面于孔内。因此，分子必须进进孔内才能被吸附和分离。
孔径和比表面积是相辅相成的两个概念。孔径小比表面积大，反之亦然。比表面积大，增加样品与键合相之间的反应，增加保存,上样量和复杂成分的分离度;比表面积小，平衡时间快，适合梯度分析。
⑥孔容和机械强度
孔容，又称“孔体积”。指单位颗粒的空隙体积大小。它能很好的反应填料的机械强度。孔体积大的填料相对孔体积小的填料机械强度要略弱。孔体积为1.5mL/g或更小的填料大多用于HPLC分离，而孔体积大于1.5mL/g的填料使用于尺寸排阻色谱和低压色谱。
⑦封端封端
封端能够降低极性碱性化合物由于与裸露的硅醇基相互作用而产生的拖尾峰。不封端键合相相对封端键合相会产生不同的选择性，尤其是极性样品。
更新时间：2020-02-26 
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