鸡肉中利巴韦林的检测方案

一、 样品前处理方法
        2g鸡肉，加入15mL水，涡旋混匀，超声提取10min，2000xg离心5min，取3mL上清进行固相萃取，固相萃取柱为HyperSep HyperCarb 色谱柱(200mg/3mL，货号60106-301)，固相萃取步骤如下：
        活化：1mL 乙腈，1mL乙醇，负压过柱
        上样：3mL 上清液，1mL/min速率过柱
        洗脱：500μL 20%乙腈-水溶液洗脱，1mL/min
        洗脱两次，合并洗脱液，直接进行LC-MS/MS分析。
二、 样品分析方法
1. 仪器
       Accela HPLC；TSuantum Access MAX 三重串联四级杆质谱检测器；Hypercarb 液相色谱柱(100x2.1mm，5μm，货号35005-102130)。
2. 参数设置
    液相参数：
            柱温：室温
            进样量：10μL
            梯度：

质谱参数：

        离子化模式：电喷雾电离，正离子模式；

        质谱扫描方式：选择反应监测（SRM）；

        分辨率：单位分辨率；

        毛细管温度：350℃；

        雾化温度：350℃；

        喷雾电压：3700V；

        鞘气压力：30 arb；

        辅助气流速：10 arb；

        碰撞气压力：1.0 mTorr；

        离子对参数见下表：

3.色谱图
    见图1。

图 1  鸡肉加标样品检测结果(利巴韦林浓度，1ppb；同位素内标浓度：1ppb)

三、 结果与讨论
        利巴韦林为强极性化合物，使用水作为溶剂即可将其*提取。但常规色谱柱无法将其保留。Hypersep Hypercarb是Thermo Scientific*的固相萃取填料，基质为具有平面结构的多孔石墨化碳（PGC），能与极性化合物产生偶极-偶极相互作用而使其具有强保留性质，特别适合极性化合物的纯化。
        本实验中，使用HyperSep Hypercarb 进行样品的纯化，可以得到满意的回收率，在50ppb的加样回收试验中，回收率为121.8%，重现性良好。且方法简单，与现有方法相比，避免了反复调节pH值的步骤。而且，使用20%乙腈即可将目标物洗脱，避免在后继的分析过程中产生明显的溶剂效应。
        在分析过程中发现，利巴韦林色谱峰附近容易出现干扰物质，根据文献判断，可能为内源性的异构体。该异构体容易使结果出现假阳性，但使用HyperCarb色谱柱，在极为简单的流动相条件下，即可实现分离。